本發(fā)明屬于微生物，具體涉及一株簡(jiǎn)單純芽孢桿菌t3及其培養(yǎng)基、培養(yǎng)方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、羊肚菌(morchella?esculenta)是屬于子囊菌門(ascomycota)、盤菌綱(pezizomycetes)、盤菌目(pezizales)、羊肚菌科(morchellaceae)的珍稀食藥用菌，其子實(shí)體味道鮮美，營(yíng)養(yǎng)豐富，同時(shí)具有多糖、酚類、蛋白水解物等多種生物活性物質(zhì)，是一種重要的珍稀食用和藥用真菌。羊肚菌最初是通過分層培養(yǎng)獲得大量菌核，再用成熟的菌核誘導(dǎo)出菇，實(shí)現(xiàn)了人工栽培。此后研究表明，我國(guó)能栽培生產(chǎn)的羊肚菌品種在栽培過程中都能形成菌核，而菌核數(shù)量是羊肚菌菌種質(zhì)量的一個(gè)重要標(biāo)準(zhǔn)，也與栽培中原基形成數(shù)量成正比。

2、羊肚菌菌核形成是一個(gè)復(fù)雜的過程，菌株的活力、培養(yǎng)料以及溫度、光照、ph值和滲透壓等環(huán)境因素都能對(duì)其產(chǎn)生影響。食用菌栽培被認(rèn)為是“細(xì)菌與真菌的對(duì)話”，細(xì)菌通過真菌中的木質(zhì)纖維素酶活性降解復(fù)雜的多糖來增強(qiáng)營(yíng)養(yǎng)，真菌也能消耗細(xì)菌并吸收細(xì)菌中的碳和氮元素作為營(yíng)養(yǎng)來源。目前，有研究發(fā)現(xiàn)惡臭假單胞菌能刺激羊肚菌菌核的形成，但是其對(duì)羊肚菌菌絲的生長(zhǎng)沒有明顯影響。此外，還有研究通過添加羊肚菌菌柄土來獲得改良劑以促進(jìn)羊肚菌菌絲的生長(zhǎng)和菌核的形成，但羊肚菌菌柄土需要在種植羊肚菌后才能獲得，因此改良劑材料的來源會(huì)受到一定限制。

3、由于羊肚菌只有在土壤中才能栽培出菇，因此土壤中的微生物對(duì)羊肚菌的生長(zhǎng)可能具有非常重要的影響。但目前土壤中細(xì)菌與羊肚菌之間的互作機(jī)理研究的比較少。羊肚菌連續(xù)種植2年，就會(huì)出現(xiàn)產(chǎn)量下降、病蟲害嚴(yán)重的重茬問題，故需要提高羊肚菌菌種質(zhì)量。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、鑒于此，本發(fā)明提供一株簡(jiǎn)單純芽孢桿菌t3及其培養(yǎng)基、培養(yǎng)方法和應(yīng)用，該菌株能夠顯著促進(jìn)羊肚菌的菌絲生長(zhǎng)和菌核形成，進(jìn)而提高菌種質(zhì)量、縮短羊肚菌的制種周期。

2、為解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明的第一方面提供一株簡(jiǎn)單純芽孢桿菌(peribacillus?simplex)t3，于2024年5月11日保藏在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為cctcc?no：m?2024904，保藏地址為湖北省武漢市武昌區(qū)八一路299號(hào)。

3、本發(fā)明提供的簡(jiǎn)單純芽孢桿菌t3從羊肚菌的菌基土壤中經(jīng)分離、篩選獲得，經(jīng)形態(tài)學(xué)、生理生化特征和16s?rdna測(cè)序結(jié)果初步確定菌株t3為簡(jiǎn)單純芽孢桿菌。該菌株形成的菌落顏色呈乳白色，菌落表面干燥、凸起，光滑，易挑起，菌落形態(tài)規(guī)則，革蘭氏染色呈陽性，菌體細(xì)胞呈桿狀。將本發(fā)明提供的菌株t3接種于羊肚菌原種和/或栽培種培養(yǎng)料中，可將羊肚菌的菌絲生長(zhǎng)速率提高10％以上，同時(shí)還可明顯促進(jìn)羊肚菌菌核的形成。

4、本發(fā)明的第二方面提供一種保藏編號(hào)為cctcc?no：m?2024904的簡(jiǎn)單純芽孢桿菌(peribacillus?simplex)t3的液體培養(yǎng)基，每升所述液體培養(yǎng)基的組成包括：氮源5～15g，酵母粉2.5～7g，無機(jī)鹽2.5～10mg，余量為水。

5、結(jié)合第二方面，所述氮源為胰蛋白胨和/或蛋白胨；所述無機(jī)鹽選自含有下述至少一種離子的水溶性鹽：fe2+、cu2+、mn2+、k+、po43-、mg2+和ca2+。

6、優(yōu)選地，每升所述液體培養(yǎng)基包括：胰蛋白胨12g，酵母粉6.25g，feso45mg，余量為水。

7、本發(fā)明的第三方面提供一種保藏編號(hào)為cctcc?no：m?2024904的簡(jiǎn)單純芽孢桿菌(peribacillus?simplex)t3的培養(yǎng)方法，具體包括：將菌株t3接種于上述液體培養(yǎng)基中，于20～40℃下?lián)u瓶培養(yǎng)，初始ph?6.0～8.5；其中，所述搖瓶培養(yǎng)基的裝液量為30～150ml/250ml，轉(zhuǎn)速為140～220r/min。

8、優(yōu)選地，將菌株t3接種于上述液體培養(yǎng)基中，于25℃下?lián)u瓶培養(yǎng)，初始ph為7.5，搖瓶培養(yǎng)基的裝液量為30ml/250ml，轉(zhuǎn)速為200r/min。

9、本發(fā)明的第四方面提供一種保藏編號(hào)為cctcc?no：m?2024904的簡(jiǎn)單純芽孢桿菌(peribacillus?simplex)t3在促進(jìn)羊肚菌菌絲生長(zhǎng)和/或菌核形成中的應(yīng)用。

10、結(jié)合第四方面，所述羊肚菌可以為任意可栽培的羊肚菌品種，包括但不限于六妹羊肚菌、七妹羊肚菌和梯棱羊肚菌。

11、結(jié)合第四方面，將菌株t3置于所述液體培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng)12～18h，用無菌水稀釋至od600值為1.0時(shí)離心、獲得菌體，之后用無菌水重懸至相應(yīng)濃度制備菌液；將羊肚菌菌種接種在相匹配的原種或栽培種基質(zhì)中培養(yǎng)，同時(shí)接種t3菌液，靜置培養(yǎng)。

12、示例性地，首先，將菌株t3置于所述液體培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng)16h，用無菌水稀釋至od600值為1.0時(shí)離心、獲得菌體，之后用無菌水重懸至相應(yīng)濃度；其次，制備羊肚菌原種和/或栽培種培養(yǎng)基，比如：六妹羊肚菌菌株的培養(yǎng)基配方可以為：60wt％的麥粒、21wt％的麩皮、17wt％的玉米芯、1wt％的石膏和1wt％的生石灰，七妹羊肚菌菌株的培養(yǎng)基配方可以為：58wt％的麥粒、12wt％的麩皮、28wt％的玉米芯、1wt％的石膏和1wt％的生石灰。培養(yǎng)袋裝量為450g，含水量為60％～65％；最后，分別接種3個(gè)直徑為10mm的六妹羊肚菌或七妹羊肚菌菌餅于相匹配的原種和/或栽培種培養(yǎng)基中，同時(shí)接種3ml的t3菌液，于18℃下靜置培養(yǎng)。

13、本發(fā)明的第五方面提供一種保藏編號(hào)為cctcc?no：m?2024904的簡(jiǎn)單純芽孢桿菌(peribacillus?simplex)t3在提高羊肚菌菌種質(zhì)量中的應(yīng)用。

14、本發(fā)明的第六方面提供一種保藏編號(hào)為cctcc?no：m?2024904的簡(jiǎn)單純芽孢桿菌(peribacillus?simplex)t3在縮短羊肚菌菌種制備周期中的應(yīng)用。

15、本發(fā)明提供了一株簡(jiǎn)單純芽孢桿菌t3及其培養(yǎng)基、培養(yǎng)方法和應(yīng)用，菌株t3能夠同時(shí)顯著促進(jìn)羊肚菌的菌絲生長(zhǎng)和菌核形成，對(duì)于提高羊肚菌菌種質(zhì)量和縮短羊肚菌的制種周期具有重要意義。而且，本發(fā)明提供的菌株t3的培養(yǎng)基成分易獲得，培養(yǎng)方法簡(jiǎn)單，利于實(shí)現(xiàn)規(guī)?；瘧?yīng)用。

技術(shù)特征：

1.一株簡(jiǎn)單純芽孢桿菌(peribacillus?simplex)t3，其特征在于，于2024年5月11日保藏在中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為cctcc?no：m2024904，保藏地址為湖北省武漢市武昌區(qū)八一路299號(hào)。

2.一種保藏編號(hào)為cctcc?no：m?2024904的簡(jiǎn)單純芽孢桿菌(peribacillus?simplex)t3的液體培養(yǎng)基，其特征在于，每升所述液體培養(yǎng)基的組成包括：氮源5～15g，酵母粉2.5～7g，無機(jī)鹽2.5～10mg，余量為水。

3.如權(quán)利要求2所述的液體培養(yǎng)基，其特征在于，所述氮源為胰蛋白胨和/或蛋白胨；所述無機(jī)鹽選自含有下述至少一種離子的水溶性鹽：fe2+、cu2+、mn2+、k+、po43-、mg2+和ca2+。

4.如權(quán)利要求2所述的液體培養(yǎng)基，其特征在于，每升所述液體培養(yǎng)基包括：胰蛋白胨12g，酵母粉6.25g，feso4?5mg，余量為水。

5.一種保藏編號(hào)為cctcc?no：m?2024904的簡(jiǎn)單純芽孢桿菌(peribacillus?simplex)t3的培養(yǎng)方法，其特征在于，將菌株t3接種于權(quán)利要求2所述的液體培養(yǎng)基中，于20～40℃下?lián)u瓶培養(yǎng)，初始ph為6.0～8.5；其中，所述搖瓶培養(yǎng)基的裝液量為30～150ml/250ml，轉(zhuǎn)速為140～220r/min。

6.如權(quán)利要求5所述的培養(yǎng)方法，其特征在于，將菌株t3接種于權(quán)利要求2所述的液體培養(yǎng)基中，于25℃下?lián)u瓶培養(yǎng)，初始ph為7.5；其中，所述液體搖瓶培養(yǎng)基的裝液量為30ml/250ml，轉(zhuǎn)速為200r/min。

7.保藏編號(hào)為cctcc?no：m?2024904的簡(jiǎn)單純芽孢桿菌(peribacillus?simplex)t3在促進(jìn)羊肚菌菌絲生長(zhǎng)和/或菌核形成中的應(yīng)用。

8.如權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，將菌株t3置于所述液體培養(yǎng)基中振蕩培養(yǎng)12～18h，用無菌水稀釋至od600值為1.0時(shí)離心、獲得菌體，之后用無菌水重懸至相應(yīng)濃度制備菌液；將羊肚菌菌種接種在相匹配的原種或栽培種基質(zhì)中培養(yǎng)，同時(shí)接種t3菌液，靜置培養(yǎng)。

9.保藏編號(hào)為cctcc?no：m?2024904的簡(jiǎn)單純芽孢桿菌(peribacillus?simplex)t3在提高羊肚菌菌種質(zhì)量中的應(yīng)用。

10.保藏編號(hào)為cctcc?no：m?2024904的簡(jiǎn)單純芽孢桿菌(peribacillus?simplex)t3在縮短羊肚菌菌種制備周期中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一株簡(jiǎn)單純芽孢桿菌T3及其培養(yǎng)基、培養(yǎng)方法和應(yīng)用。本發(fā)明提供了一株保藏編號(hào)為CCTCC?NO：M?2024904的簡(jiǎn)單純芽孢桿菌T3及其培養(yǎng)基、培養(yǎng)方法和應(yīng)用。該菌株T3能夠同時(shí)促進(jìn)羊肚菌的菌絲生長(zhǎng)和菌核形成，對(duì)菌絲生長(zhǎng)速度的提高超10％，對(duì)于提高羊肚菌菌種質(zhì)量、縮短羊肚菌的制種周期、降低生產(chǎn)成本具有重要意義。本發(fā)明提供的菌株T3的培養(yǎng)基成分易獲得，培養(yǎng)方法簡(jiǎn)單，利于實(shí)現(xiàn)規(guī)?；瘧?yīng)用。

技術(shù)研發(fā)人員：馬宏,張淑曼,王文穎,魯銘穎,張根偉,劉昆昂,李書生
受保護(hù)的技術(shù)使用者：河北省科學(xué)院生物研究所
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/8