本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種糖基化間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體及其制備方法和應(yīng)用、藥物組合物。

背景技術(shù)：

1、糖尿病(diabetes?mellitus)是一種由于胰島素分泌缺陷或胰島素作用障礙所致的以高血糖為特征的代謝性疾病。在糖尿病患者中，以2型糖尿病（type?2?diabetesmellitus，t2dm）為主，占90%以上。2型糖尿病是指由于遺傳和（或）環(huán)境因素引起胰島素分泌不足和（或）胰島素抵抗（機(jī)體對胰島素敏感性下降，不能有效利用），導(dǎo)致血糖水平增高的一種慢性病。傳統(tǒng)治療方法包括使用外源性胰島素和口服降糖藥，盡管這些方法可以快速控制血糖，但它們無法模擬內(nèi)源性胰島素的自然活性，并且難以改善周圍胰島素抵抗和緩解糖尿病并發(fā)癥。

2、近年來，間充質(zhì)干細(xì)胞（mscs）成為再生醫(yī)學(xué)應(yīng)用的潛在治療劑，在特定條件下，mscs可以分化為胰島β細(xì)胞，從而增加胰島細(xì)胞數(shù)量，促進(jìn)胰島功能恢復(fù)，并改善t2dm，然而，msc療法存在潛在感染、免疫反應(yīng)和全身過敏等風(fēng)險。mscs的治療效果主要?dú)w因于其旁分泌產(chǎn)物，其中外泌體（evs）是一個關(guān)鍵組成部分，外泌體含有大量生物活性化合物，如蛋白質(zhì)、核酸和脂質(zhì)，蛋白質(zhì)和脂質(zhì)主要以糖蛋白和糖脂的形式存在，是細(xì)胞膜的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)元素，并參與外泌體內(nèi)的許多生物和病理過程。

3、然而，盡管msc-evs在治療t2dm中已經(jīng)展現(xiàn)出良好的潛力，但msc-evs在治療t2dm中的靶向性和療效一般，阻礙了其臨床應(yīng)用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本公開有鑒于上述現(xiàn)有技術(shù)的狀況而完成，其目的在于提供一種糖基化間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體及其制備方法和應(yīng)用、藥物組合物。

2、為此，本公開第一方面提供一種用于治療2型糖尿病的糖基化間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體，所述糖基化間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體表面經(jīng)過糖基化修飾以增強(qiáng)對受損組織的靶向性。本公開通過體內(nèi)和體外研究確定了糖基化間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體能夠更有效地靶向受損組織，并治療2型糖尿病，由此能夠有利于糖基化間充質(zhì)干細(xì)胞的臨床應(yīng)用。需要說明的是，外泌體若對于受損組織的靶向性較差，給予外泌體治療時可能會損傷正常組織，本公開的糖基化間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體能夠特異性地靶向受損組織，從而改善療效，減少副作用。

3、在本公開所涉及的第一方面的糖基化間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體中，可選地，所述糖基化修飾包括：暴露間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體表面的n-乙酰葡萄糖胺（glcnac）作為末端糖基；和/或，暴露所述間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體表面的半乳糖（gal）作為末端糖基。本公開中研究發(fā)現(xiàn)通過以glcnac或gal作為末端糖基出現(xiàn)在間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體表面，能夠影響外泌體的相關(guān)功能，改善間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體對受損組織的的靶向性，并提高對2型糖尿病的療效。

4、在本公開所涉及的第一方面的糖基化間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體中，可選地，所述糖基化修飾包括：去除所述間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體表面的n-乙酰神經(jīng)氨酸（neu5ac）并暴露n-乙酰葡萄糖胺（glcnac）作為末端糖基；和/或，去除所述間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體表面的n-乙酰神經(jīng)氨酸（neu5ac）并暴露半乳糖（gal）作為末端糖基。由此，能夠通過去除neu5ac以得到暴露glcnac或gal作為末端糖基的糖基化間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體。

5、在本公開所涉及的第一方面的糖基化間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體中，可選地，間充質(zhì)干細(xì)胞包括以下的至少一種：人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞、人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞。

6、在本公開所涉及的第一方面的糖基化間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體中，可選地，所述受損組織包括肝臟組織和肌肉組織中的至少一種。本公開研究發(fā)現(xiàn)，糖基化間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體能夠更好地靶向受損組織，包括肝臟組織和肌肉組織。

7、本公開第二方面提供一種用于治療2型糖尿病的糖基化間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體的制備方法，包括：去除所述間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體表面的n-乙酰神經(jīng)氨酸，以暴露半乳糖作為末端糖基，以得到所述糖基化間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體；或者，進(jìn)一步處理表面去除n-乙酰神經(jīng)氨酸的間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體并暴露n-乙酰葡萄糖胺作為末端糖基，以得到所述糖基化間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體。

8、在本公開所涉及的第二方面的制備方法中，可選地，所述制備方法包括以下的至少一種：使用α2-3,6,8,9神經(jīng)氨酸酶處理所述間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體，去除表面的n-乙酰神經(jīng)氨酸并暴露半乳糖；隨后使用β1-4半乳糖苷酶處理，暴露n-乙酰葡萄糖胺作為末端糖基，以得到暴露glcnac作為末端糖基的所述糖基化間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體；使用α2-3,6,8,9神經(jīng)氨酸酶處理所述間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體，去除表面的n-乙酰神經(jīng)氨酸并暴露半乳糖，得到暴露gal作為末端糖基的所述糖基化間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體；使用α2-3,6,8,9神經(jīng)氨酸酶處理所述間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體，去除表面的n-乙酰神經(jīng)氨酸并暴露半乳糖；隨后使用尿苷二半乳糖和β1-4半乳糖基轉(zhuǎn)移酶處理，以增加gal作為所述間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體頭部基團(tuán)的暴露概率，得到暴露gal作為末端糖基的所述糖基化間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體。

9、本公開第三方面提供一種藥物組合物，包含本申請第一方面所公開的糖基化間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體。由此，能夠通過糖基化間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體作為活性成分，用于治療2型糖尿病。

10、在本公開所涉及的第三方面的藥物組合物中，可選地，還包括藥學(xué)上可接受的載體和/或輔料，所述輔料包括稀釋劑、賦形劑、粘合劑、填充劑、助溶劑、崩解劑、潤濕劑、抗氧化劑、緩控釋劑、香味劑和甜味劑中的至少一種。由此，能夠有利于提高糖基化間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體的安全性、溶解性、穩(wěn)定性、生物利用度和便利性等。

11、本公開第四方面提供一種如本申請第一方面所公開的糖基化間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體在制備治療2型糖尿病的藥物中的應(yīng)用。

12、本公開第五方面提供一種如本申請第一方面所公開的糖基化間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體在制備提高治療2型糖尿病藥物的靶向性的試劑中的應(yīng)用。

13、根據(jù)本公開，能夠提供一種糖基化間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體及其制備方法和應(yīng)用、藥物組合物，糖基化間充質(zhì)干細(xì)胞能夠更有效地靶向受損組織，并更有效地治療2型糖尿病，由此能夠有利于間充質(zhì)干細(xì)胞的臨床應(yīng)用。

技術(shù)特征：

1.一種用于治療2型糖尿病的糖基化間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體，其特征在于，所述糖基化間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體表面經(jīng)過糖基化修飾以增強(qiáng)對2型糖尿病受損組織的靶向性。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的糖基化間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體，其特征在于，所述糖基化修飾包括：暴露間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體表面的n-乙酰葡萄糖胺作為末端糖基；和/或，暴露所述間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體表面的半乳糖作為末端糖基。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的糖基化間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體，其特征在于，所述糖基化修飾包括：去除所述間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體表面的n-乙酰神經(jīng)氨酸并暴露n-乙酰葡萄糖胺作為末端糖基；和/或，去除所述間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體表面的n-乙酰神經(jīng)氨酸并暴露半乳糖作為末端糖基。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的糖基化間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體，其特征在于，間充質(zhì)干細(xì)胞包括以下的至少一種：人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞、人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的糖基化間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體，其特征在于，所述受損組織包括肝臟組織和肌肉組織中的至少一種。

6.一種用于治療2型糖尿病的糖基化間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體的制備方法，其特征在于，包括：

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下的至少一種：

8.一種藥物組合物，包含權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的糖基化間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體，還包括藥學(xué)上可接受的載體和/或輔料。

9.一種如權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)所述的糖基化間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體在制備治療2型糖尿病的藥物中的應(yīng)用。

10.一種如權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)所述的糖基化間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體在制備提高治療2型糖尿病藥物的靶向性的試劑中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本公開描述了一種糖基化間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體及其制備方法和應(yīng)用、藥物組合物，糖基化間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體用于治療2型糖尿病，糖基化間充質(zhì)干細(xì)胞表面經(jīng)過糖基化修飾以增強(qiáng)對受損組織的靶向性。本公開中，糖基化間充質(zhì)干細(xì)胞能夠更有效地靶向受損組織，并更有效地治療2型糖尿病，由此能夠有利于間充質(zhì)干細(xì)胞的臨床應(yīng)用。

技術(shù)研發(fā)人員：陳麗,侯新國,何芹,向映月
受保護(hù)的技術(shù)使用者：山東大學(xué)齊魯醫(yī)院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/8