本發(fā)明涉及微生物，特別是涉及一株產(chǎn)抗菌肽的表皮葡萄球菌及其在皮膚抗氧化、抗菌中的應用。

背景技術：

1、近年來，抗生素過度使用導致日益嚴重的細菌耐藥性問題，對全球公共健康構成嚴重威脅。抗菌肽(antimicrobial?peptides，amps)是一類由核糖體產(chǎn)生的小分子、陽離子、兩親性多肽，其抑菌機制主要包括破壞細胞膜完整性和抑制基因表達。與干擾病原微生物代謝過程的抗生素不同，amps通常通過物理破壞微生物細胞膜脂質和誘導細胞內(nèi)容物泄漏來產(chǎn)生抗微生物作用，因此其對細菌耐藥性演化的影響很小。在人體皮膚表面棲息的凝固酶陰性葡萄球菌，包括表皮葡萄球菌、頭狀葡萄球菌和人葡萄球菌等，是抗菌肽的重要來源。從人體微生物組中挖掘新的抗菌肽生產(chǎn)菌種，能夠有效減少抗生素的依賴，緩解由此引發(fā)的耐藥性問題，成為解決細菌耐藥性危機的一個重要方向。

2、痤瘡是一種慢性炎癥性的常見皮膚疾病，多發(fā)于青少年，發(fā)病率高達90％以上。痤瘡的發(fā)生與皮脂分泌過多、毛囊皮脂腺導管角化、病原菌感染和炎癥性等因素密切相關。皮脂腺過多的皮脂分泌可導致毛孔堵塞，進而促進痤瘡丙酸桿菌等微生物的過度繁殖，進一步加重炎癥反應。目前痤瘡治療主要依賴激素類拮抗劑、維a酸類藥物、抗生素等藥物進行治療，但長期用藥有引起過敏、腎臟功能損害，甚至導致畸形等毒副作用風險。

3、痤瘡丙酸桿菌和表皮葡萄球菌是皮膚表面的主豐度菌。研究表明，在痤瘡病人皮膚存在皮膚菌群失調，表現(xiàn)為痤瘡丙酸桿菌數(shù)量增加和表皮葡萄球菌減少，兩者比例失衡導致痤瘡丙酸桿菌大量繁殖，分泌脂酶水解甘油三酯并代謝出較多的游離脂肪酸，從而加重炎癥反應。

4、目前來說，缺少能夠調節(jié)皮膚微生物群平衡，抑制痤瘡以及炎癥反應的有效手段。

技術實現(xiàn)思路

1、基于上述現(xiàn)有技術中存在的缺點，本發(fā)明目的是提供一株產(chǎn)抗菌肽的表皮葡萄球菌及其在皮膚抗氧化、抗菌中的應用。

2、本發(fā)明從健康人體皮膚篩選了一株表皮葡萄球菌，其發(fā)酵上清液、膜過濾濃縮液以及粗抗菌肽具有良好的抑制痤瘡丙酸桿菌，而對表皮葡萄球菌的生長無顯著抑制，可針對性抑制痤瘡丙酸桿菌，調節(jié)痤瘡病人的皮膚微生態(tài)平衡，為痤瘡的預防和治療提供新的解決方案。本發(fā)明提供的產(chǎn)抗菌肽的表皮葡萄球菌為新型抗菌肽的開發(fā)提供新菌種資源，為進一步研究其所產(chǎn)抗菌肽的性質、結構，開發(fā)新型、高效、抗菌肽打下基礎。

3、本發(fā)明的技術方案之一，提供一株產(chǎn)抗菌肽的表皮葡萄球菌(staphylococcusepidermidis)ccsms0776，已于2024年06月05日保存于中國普通微生物菌種保藏管理中心，保藏編號為cgmcc?30873。所述一株產(chǎn)抗菌肽的表皮葡萄球菌ccsms0776的16s?rdna核苷酸序列如seq.id.no.3所示。

4、進一步地，所述表皮葡萄球菌ccsms0776具有如下微生物學特征：為兼性厭氧菌株，不產(chǎn)生物膜。所述表皮葡萄球菌ccsms0776的菌株在tsa血平板上菌落呈圓形、邊緣整齊、乳白色，表面濕潤、光滑、隆起、易于挑起。所述表皮葡萄球菌ccsms0776革蘭氏染色呈陽性，菌體形態(tài)為球狀，排列成葡萄狀，也有單個排列，無鞭毛，不能運動，不產(chǎn)芽孢。所述菌株ccsms0776的延遲期相對較短，2h進入對數(shù)生長期，10h達到穩(wěn)定期。

5、進一步地，提供所述一株產(chǎn)抗菌肽的表皮葡萄球菌ccsms0776的篩選方法，包括以下步驟：

6、以痤瘡丙酸桿菌為指示菌，采用96孔板測試不同表皮葡萄球菌發(fā)酵上清對指示菌作體外抑菌實驗，初步篩選有抑菌效果的菌株；進一步排除酸抑制、過氧化氫抑制來復篩，確定目標菌株ccsms0776。具體步驟包括：(1)將健康人體表面分離得到的表皮葡萄球菌接種至tsb液體培養(yǎng)基中，于36～38℃(優(yōu)選為37℃)培養(yǎng)18～22h(優(yōu)選為20h)，離心；(2)以痤瘡丙酸桿菌和表皮葡萄球菌為指示菌，將所得的發(fā)酵上清液使用96孔板對指示菌作體外抑菌實驗，初步篩選有抑菌效果的菌株；(3)使用0.5mol/l?naoh溶液將上述發(fā)酵上清液ph值調整為ph≥6，在80℃中恒溫水浴10min去除過氧化氫的影響，進行平行對比篩選出抑菌活性較好的目標菌株ccsms0776。

7、進一步地，提供所述表皮葡萄球菌ccsms0776的發(fā)酵上清液，該發(fā)酵上清液的制備方法為：

8、將表皮葡萄球菌ccsms?0776接種至發(fā)酵容器中，培養(yǎng)得到發(fā)酵液；將發(fā)酵液離心去除菌體，即得到表皮葡萄球菌ccsms0776的發(fā)酵上清液。

9、所述發(fā)酵容器為三角瓶、發(fā)酵罐等本領域常見的設備；所述接種的接種量為1.8～2.2％(v/v)，優(yōu)選為2％(v/v)；所述培養(yǎng)的條件為本領域常見的發(fā)酵條件，優(yōu)選為溫度36～38℃，更優(yōu)選為37℃；可選擇150～200r/min搖床振蕩培養(yǎng)或在發(fā)酵罐中使用攪拌槳進行攪拌；所述離心的條件為6000～10000r/min，5～10min，優(yōu)選為8000r/min離心5min。

10、本發(fā)明的技術方案之二，提供一種抗菌肽，該抗菌肽來自上述技術方案所述的表皮葡萄球菌ccsms0776。

11、進一步地，所述抗菌肽的制備方法，包括以下步驟：將上述技術方案得到的表皮葡萄球菌ccsms0776的發(fā)酵上清液通過截留分子量10kda超濾膜過濾和硫酸銨分級沉淀，收集75％和100％飽和度的沉淀組分，透析、冷凍干燥，即得到所述抗菌肽。

12、所述硫酸銨分級沉淀是一種常用的蛋白質分離技術，其基本原理是通過調節(jié)硫酸銨的濃度來改變?nèi)芤褐械碾x子強度，從而影響不同蛋白質的溶解度，實現(xiàn)蛋白質的分離和純化。

13、進一步地，所述抗菌肽，經(jīng)蛋白含量分析、紫外光譜掃描分析，進一步確定為多肽類物質，75％飽和度的硫酸銨沉淀組分蛋白含量為56.23％，100％飽和度的硫酸銨沉淀組分蛋白含量為42.27％，且兩種飽和度的抗菌肽具有良好的抗氧化作用和抑菌效果，并且75％飽和度組分對痤瘡丙酸桿菌的抑制效果優(yōu)于100％飽和度組分。

14、本發(fā)明的技術方案之三，提供所述表皮葡萄球菌ccsms0776及其發(fā)酵上清液和提取的抗菌肽在皮膚抗氧化、抗菌方面的應用，所述表皮葡萄球菌ccsms0776、及其發(fā)酵上清液和提取的抗菌肽用于制備抗氧化、抗菌的產(chǎn)品。所述產(chǎn)品能夠對抗dpph自由基和痤瘡丙酸桿菌對皮膚造成的損傷。

15、進一步地，所述表皮葡萄球菌ccsms0776發(fā)酵上清液和抗菌肽對dpph自由基具有良好的清除效果，顯示出較強的抗氧化性。

16、進一步地，所述表皮葡萄球菌ccsms0776發(fā)酵上清液和抗菌肽對痤瘡丙酸桿菌atcc?11827和atcc?6919有明顯的抑制作用，而對表皮葡萄球菌atcc?35984和atcc?12228沒有明顯的抑制作用。

17、進一步地，所述產(chǎn)品為以下類型的產(chǎn)品中的任一種：

18、1)改善痤瘡的產(chǎn)品；所述改善痤瘡的產(chǎn)品用于抑制痤瘡丙酸桿菌的生長；

19、2)調節(jié)皮膚菌群平衡的產(chǎn)品。

20、進一步地，所述產(chǎn)品為藥品、護膚品、護發(fā)產(chǎn)品中的任一種。

21、相對于現(xiàn)有技術，本發(fā)明具有如下有益效果：

22、(1)本發(fā)明從調節(jié)皮膚微生物群平衡的角度，篩選能夠抑制痤瘡丙酸桿菌和表皮葡萄球菌，是一種預防和治療痤瘡的安全、有效手段。

23、(2)本發(fā)明提供了一株分離自健康皮膚的表皮葡萄球菌，其發(fā)酵上清液、超濾膜過濾濃縮液以及粗抗菌肽具有良好的抑制痤瘡丙酸桿菌的效果，為新型抗菌肽的開發(fā)提供新菌種資源。

24、(3)本發(fā)明提供的表皮葡萄球菌的抗菌肽具有良好的抑制痤瘡丙酸桿菌，而對表皮葡萄球菌生長無顯著抑制，可針對性抑制痤瘡丙酸桿菌，調節(jié)痤瘡人群的皮膚微生態(tài)平衡，為痤瘡的預防和治療提供新的解決方案，在痤瘡治療中有著廣泛的應用前景。