本發(fā)明涉及生物，具體涉及檢測(cè)fbf1基因或fbf1蛋白的產(chǎn)品在制備乳腺癌細(xì)胞干性特征檢測(cè)工具中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤，嚴(yán)重影響著女性的身心健康。當(dāng)發(fā)生惡性病變時(shí)，往往會(huì)發(fā)生乳腺癌的遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移，如骨、腦和肺部轉(zhuǎn)移等，最終導(dǎo)致患者死亡。

2、腫瘤轉(zhuǎn)移是臨床上大多數(shù)惡性腫瘤患者治療失敗和死亡的主要原因。同時(shí)，腫瘤轉(zhuǎn)移是一個(gè)綜合性、多階段、多步驟的復(fù)雜過程，在早期階段，絕大多數(shù)腫瘤細(xì)胞都可以侵入血管、存活并溢出血管到達(dá)預(yù)期的轉(zhuǎn)移位置。可是，在腫瘤轉(zhuǎn)移晚期階段，只有不到2％的腫瘤細(xì)胞可以在靶器官中生長并形成微小轉(zhuǎn)移灶，而最終可以發(fā)展成為腫瘤轉(zhuǎn)移灶的細(xì)胞僅約為0.02％。因此，找到這群細(xì)胞，并深入探討其發(fā)揮作用的分子機(jī)制，對(duì)于腫瘤惡性化機(jī)理的闡明以及相關(guān)抗腫瘤藥物的研發(fā)都具有極其重要的意義。

3、研究表明，能夠最終實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞一定是具有某些內(nèi)在特異性的，能夠適應(yīng)轉(zhuǎn)移時(shí)微環(huán)境的改變以及靶器官的新環(huán)境，并在新環(huán)境中完成自我復(fù)制、生長和增殖，而根據(jù)目前的研究，腫瘤干細(xì)胞(cancer?stem?cells,cscs)擁有此特異性。同時(shí)，腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制的“種子與土壤”學(xué)說認(rèn)為，轉(zhuǎn)移高發(fā)組織提供適宜癌細(xì)胞增殖的微環(huán)境，即“土壤”，轉(zhuǎn)移至此處的癌細(xì)胞“種子”經(jīng)過篩選，最適宜生存的癌細(xì)胞便可經(jīng)過生長增殖而形成腫瘤。隨著對(duì)cscs研究的興起以及對(duì)乳腺癌、前列腺癌等實(shí)體腫瘤干細(xì)胞成功的鑒定和分離，已有大量證據(jù)顯示cscs正是我們要尋找的這群“種子”細(xì)胞。這部分細(xì)胞既可以逃避機(jī)體自身免疫系統(tǒng)的識(shí)別，又對(duì)外界的殺傷具有抵抗能力，最終可以在一定的因素誘導(dǎo)下形成腫瘤轉(zhuǎn)移位點(diǎn)。由此可見，cscs與腫瘤轉(zhuǎn)移關(guān)系密切。因此檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞干性特征意義重大，有助于準(zhǔn)確評(píng)價(jià)癌癥的發(fā)生、發(fā)展，有利于治療措施的制定，改善患者的預(yù)后。因此，有必要開發(fā)檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞干性特征的新途徑。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、為檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞干性特征，本發(fā)明提供了檢測(cè)fbf1基因或fbf1蛋白的產(chǎn)品在制備乳腺癌細(xì)胞干性特征檢測(cè)工具中的應(yīng)用。本發(fā)明提供的fbf1基因或fbf1蛋白能作為乳腺癌細(xì)胞干性特征的檢測(cè)標(biāo)志物，fbf1在乳腺癌中高表達(dá)，能用于制備檢測(cè)乳腺癌的工具。

2、本發(fā)明提供了檢測(cè)fbf1基因或fbf1蛋白的產(chǎn)品在制備乳腺癌細(xì)胞干性特征檢測(cè)工具中的應(yīng)用，所述fbf1基因的編碼序列為seq?id?no.1所示，所述fbf1蛋白的氨基酸序列如seq?id?no.2所示。

3、本發(fā)明提供的fbf1基因或fbf1蛋白能作為乳腺癌細(xì)胞干性特征的檢測(cè)標(biāo)志物，fbf1在乳腺癌中高表達(dá)，能用于制備檢測(cè)乳腺癌的工具。

4、進(jìn)一步地，所述檢測(cè)fbf1基因或fbf1蛋白的產(chǎn)品包括檢測(cè)fbf1基因或fbf1蛋白表達(dá)水平的試劑。

5、進(jìn)一步地，所述檢測(cè)fbf1基因表達(dá)水平的試劑包括seq?id?no.3～seq?id?no.4所示的擴(kuò)增fbf1基因的引物。

6、進(jìn)一步地，所述工具包括能夠結(jié)合fbf1基因的核酸或者能夠結(jié)合fbf1蛋白的物質(zhì)。

7、進(jìn)一步地，所述能夠結(jié)合fbf1蛋白的物質(zhì)包括與fbf1蛋白特異性結(jié)合的抗體。

8、本發(fā)明還提供了一種含有所述的干擾fbf1基因的shrna的干擾載體，所述shrna的干擾載體通過seq?id?no.5所示shrna經(jīng)退火生成雙鏈產(chǎn)物后與plv-h1-ef1α-puro載體連接所得。

9、本發(fā)明還提供了一種含有所述的干擾載體的慢病毒，通過將shrna的干擾載體進(jìn)行慢病毒包裝后所得。

10、本發(fā)明還提供了fbf1基因抑制劑在制備治療乳腺癌藥物中的應(yīng)用，所述fbf1基因抑制劑以所述的干擾fbf1基因的shrna為唯一有效成分。

11、進(jìn)一步地，所述藥物具備如下功效：

12、抑制乳腺癌細(xì)胞干性；

13、降低了乳腺癌細(xì)胞的側(cè)群細(xì)胞比例和成球能力。

14、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果在于：

15、本發(fā)明提供的fbf1基因或fbf1蛋白能作為乳腺癌細(xì)胞干性特征的檢測(cè)標(biāo)志物，fbf1在乳腺癌中高表達(dá)，能用于制備檢測(cè)乳腺癌的工具。

16、本發(fā)明中的fbf1在乳腺癌中高表達(dá)，通過side?population實(shí)驗(yàn)、成球?qū)嶒?yàn)、qrt-pcr實(shí)驗(yàn)和western?blot實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，沉默fbf1基因可以抑制乳腺癌細(xì)胞干性，而當(dāng)過表達(dá)fbf1基因時(shí)，則可以增加側(cè)群細(xì)胞比例，增強(qiáng)細(xì)胞成球能力，同時(shí)可以促進(jìn)sox2和oct4等腫瘤細(xì)胞干性標(biāo)志物的表達(dá)。分子機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，fbf1可以通過pi3k/akt/sox2信號(hào)通路促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞干性特征。

17、本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)了fbf1的表達(dá)與乳腺癌細(xì)胞干性特征有關(guān)，乳腺癌細(xì)胞的干性特征在一定程度上可以反映乳腺癌患者發(fā)生轉(zhuǎn)移和出現(xiàn)治療耐藥的可能性，為乳腺癌的治療提供了新的思路和新的方案。

技術(shù)特征：

1.檢測(cè)fbf1基因或fbf1蛋白的產(chǎn)品在制備乳腺癌細(xì)胞干性特征檢測(cè)工具中的應(yīng)用，其特征在于，所述fbf1基因的編碼序列為seq?id?no.1所示，所述fbf1蛋白的氨基酸序列如seq?id?no.2所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)fbf1基因或fbf1蛋白的產(chǎn)品在制備乳腺癌細(xì)胞干性特征檢測(cè)工具中的應(yīng)用，其特征在于，所述檢測(cè)fbf1基因或fbf1蛋白的產(chǎn)品包括檢測(cè)fbf1基因或fbf1蛋白表達(dá)水平的試劑。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測(cè)fbf1基因或fbf1蛋白的產(chǎn)品在制備乳腺癌細(xì)胞干性特征檢測(cè)工具中的應(yīng)用，其特征在于，所述檢測(cè)fbf1基因表達(dá)水平的試劑包括seq?id?no.3～seq?id?no.4所示的擴(kuò)增fbf1基因的引物。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)fbf1基因或fbf1蛋白的產(chǎn)品在制備乳腺癌細(xì)胞干性特征檢測(cè)工具中的應(yīng)用，其特征在于，所述工具包括能夠結(jié)合fbf1基因的核酸或者能夠結(jié)合fbf1蛋白的物質(zhì)。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測(cè)fbf1基因或fbf1蛋白的產(chǎn)品在制備乳腺癌細(xì)胞干性特征檢測(cè)工具中的應(yīng)用，其特征在于，所述能夠結(jié)合fbf1蛋白的物質(zhì)包括與fbf1蛋白特異性結(jié)合的抗體。

6.一種干擾fbf1基因的shrna，其特征在于，所述shrna的序列如seq?id?no.5所示。

7.一種含有權(quán)利要求6所述的干擾fbf1基因的shrna的干擾載體，其特征在于，所述shrna的干擾載體通過seq?id?no.5所示shrna經(jīng)退火生成雙鏈產(chǎn)物后與plv-h1-ef1α-puro載體連接所得。

8.一種含有權(quán)利要求7所述的干擾載體的慢病毒，其特征在于，通過將shrna的干擾載體進(jìn)行慢病毒包裝后所得。

9.fbf1基因抑制劑在制備治療乳腺癌藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述fbf1基因抑制劑以權(quán)利要求6所述的干擾fbf1基因的shrna為唯一有效成分。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的fbf1基因抑制劑在制備治療乳腺癌藥物中的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物具備如下功效：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體公開了檢測(cè)FBF1基因或FBF1蛋白的產(chǎn)品在制備乳腺癌細(xì)胞干性特征檢測(cè)工具中的應(yīng)用，所述FBF1基因的編碼序列為SEQ?ID?NO.1所示，所述FBF1蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。本發(fā)明提供的FBF1基因或FBF1蛋白能作為乳腺癌細(xì)胞干性特征的檢測(cè)標(biāo)志物，F(xiàn)BF1在乳腺癌中高表達(dá)，能用于制備檢測(cè)乳腺癌的工具。

技術(shù)研發(fā)人員：郭春磊,梁昂,李爽,劉嘉晴,馬玉秋
受保護(hù)的技術(shù)使用者：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/8