本發(fā)明涉及微生物發(fā)酵領域和飼料蛋白領域，具體涉及一種ddgs制備高蛋白濃度飼料蛋白的方法。
背景技術：
1、玉米干酒精糟及其可溶物（ddgs）是玉米工業(yè)化生產(chǎn)酒精后剩余的殘渣經(jīng)干燥處理形成的物質(zhì)，近幾年，我國的工業(yè)用燃料乙醇生產(chǎn)量大幅度增加，來自玉米乙醇生產(chǎn)的ddgs飼料量也在逐漸擴大，因此ddgs也日益成為飼料工業(yè)關注的熱點。但ddgs中粗蛋白含量較低且質(zhì)量較差，且含有大量的粗纖維，畜禽難以消化。嚴重影響了玉米ddgs在畜禽飼料中的大比例添加和大規(guī)模應用。
2、目前微生物飼料蛋白從單一菌種的發(fā)酵發(fā)展趨向于混合菌株的協(xié)同發(fā)酵，常用發(fā)酵菌種主要為枯草芽孢桿菌、酵母菌、霉菌等。微生物飼料蛋白的蛋白質(zhì)含量影響產(chǎn)品的品質(zhì)及價格，因此，提高飼料蛋白的蛋白質(zhì)含量迫在眉睫。
3、本發(fā)明通過兩步法微生物發(fā)酵ddgs，并添加尿素及硫酸銨利用菌株，將無機氮轉(zhuǎn)化為有機氮，并利用各菌種的作用及協(xié)同作用，降解ddgs纖維素含量、提高蛋白含量，建立了一種ddgs制備高蛋白濃度飼料蛋白的方法。上述發(fā)明未見報道。
技術實現(xiàn)思路
1、本發(fā)明的目的是，建立一種ddgs制備高蛋白濃度飼料蛋白的方法。
2、為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的提供的技術方案如下：
3、一種高蛋白濃度飼料蛋白的制備方法，其特征在于它是利用廉價氮源多菌混合兩步發(fā)酵制備高蛋白濃度飼料蛋白，其具體方法步驟如下：
4、（1）ddgs滅菌冷卻后，按10%-15%接種量接種混合菌株種子液，添加1%-3%尿素，并用無菌水調(diào)節(jié)固液比為1:1-1:1.5(g:ml)，充分翻拌混勻后，30℃-35℃發(fā)酵72-120?h，并每24?h進行翻曲，得到發(fā)酵產(chǎn)物a；所述的混合菌株為黑曲霉aspergillus?niger?cicc41672、產(chǎn)朊假絲酵母candida?utilis?cicc1807、枯草芽孢桿菌bacillus?subtilis?cicc24713、凝結芽孢桿菌bacillus?coagulans?cicc21736、里氏木霉trichoderma?reesei?cicc2626、米曲霉aspergillus?oryzae?cicc41461、米曲霉aspergillus?oryzae?atcc11488，其體積比為1:1.5:1:1:2:1:1；本發(fā)明所采用的米曲霉和產(chǎn)朊假絲酵母能利用尿素，混合發(fā)酵后尿素利用率達87-91%。
5、（2）固態(tài)發(fā)酵結束后轉(zhuǎn)為液態(tài)發(fā)酵，將發(fā)酵產(chǎn)物a轉(zhuǎn)至5?l發(fā)酵罐中，添加0.5%-2%硫酸銨，以無菌水調(diào)節(jié)固液比為1:3-1:7(g:ml)，按5-15%接種量接入釀酒酵母種子液，30℃發(fā)酵48-60?h，得到發(fā)酵產(chǎn)物b；所述的釀酒酵母指的是：釀酒酵母saccharomycescerevisiae?cicc1562購自于中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心，其利用硫酸銨且菌體蛋白含量高，其菌體蛋白含量為60.15%。
6、（3）將發(fā)酵產(chǎn)物b固液分離，固體部分60℃-65℃烘干粉碎后即為制得的高蛋白濃度飼料蛋白。
7、本發(fā)明進一步公開了所述的制備方法在用于提高ddgs原料利用價值中的應用；實驗結果顯示：最終30?l放大發(fā)酵所產(chǎn)飼料蛋白中粗蛋白含量達70%-75%。滿足酒精廢料ddgs無害化處理及利用的需求，提高ddgs利用率。
8、本發(fā)明更加詳細的制備方法如下：
9、一種固態(tài)發(fā)酵的菌種組合，具體如下：
10、優(yōu)選地，以黑曲霉aspergillus?niger?cicc41672、產(chǎn)朊假絲酵母candida?utiliscicc1807、枯草芽孢桿菌bacillus?subtilis?cicc24713、凝結芽孢桿菌bacilluscoagulans?cicc21736、里氏木霉trichoderma?reesei?cicc2626、米曲霉aspergillusoryzae?cicc41461、米曲霉aspergillus?oryzae?atcc11488進行固態(tài)發(fā)酵，以降解ddgs中纖維素含量，且利用無機氮尿素，將無機氮轉(zhuǎn)化為有機氮，以提高產(chǎn)物蛋白質(zhì)含量；
11、優(yōu)選地，黑曲霉aspergillus?niger?cicc41672、里氏木霉trichoderma?reeseicicc2626、米曲霉aspergillus?oryzae?cicc41461、米曲霉aspergillus?oryzaeatcc11488的孢子數(shù)≥108個孢子/ml，體積比為1:2:1:1；
12、優(yōu)選地，產(chǎn)朊假絲酵母candida?utilis?cicc1807、枯草芽孢桿菌bacillussubtilis?cicc24713、凝結芽孢桿菌bacillus?coagulans?cicc21736的菌液活菌數(shù)≥109cfu/ml，體積比為1.5:1:1。
13、本發(fā)明另一個優(yōu)選方案是利用廉價氮源多菌混合兩步發(fā)酵制備高蛋白濃度飼料蛋白，具體如下：
14、所述兩步發(fā)酵為：將上述混合菌株種子液接種至曲塊，添加尿素，并用無菌水調(diào)節(jié)固液比為1:1-1:1.5(g:ml)，充分翻拌混勻后，30℃-35℃發(fā)酵72-120?h得到發(fā)酵產(chǎn)物a，將發(fā)酵產(chǎn)物a轉(zhuǎn)至5?l發(fā)酵罐中添加硫酸銨，以無菌水調(diào)節(jié)固液比為1:3-1:7(g:ml)，接入釀酒酵母cicc1562種子液，30℃發(fā)酵48-60?h，得到發(fā)酵產(chǎn)物b；發(fā)酵產(chǎn)物b固液分離，固體部分60℃-65℃烘干粉碎后即為制得的高蛋白濃度飼料蛋白；
15、優(yōu)選地，混合菌株種子液接種量為10%-15%；
16、優(yōu)選地，尿素添加量為1%-3%；
17、優(yōu)選地，釀酒酵母cicc1562種子液接種量為5%-15%；
18、優(yōu)選地，硫酸銨添加量為0.5%-2%。
19、本發(fā)明主要解決了以ddgs為原料制備的飼料蛋白中蛋白含量較低的問題，緩解了我國蛋白飼料資源的緊張局面，重點考察了ddgs兩步發(fā)酵制備飼料蛋白的方法，主要的難點在于發(fā)酵菌種的組合及發(fā)酵工藝。
20、本發(fā)明公開的ddgs制備高蛋白濃度飼料蛋白方法與現(xiàn)有技術相比所具有的積極效果在于：
21、（1）本發(fā)明提供了的ddgs制備高蛋白濃度飼料蛋白的方法，以ddgs作為發(fā)酵原料，采用多菌混合兩步發(fā)酵生產(chǎn)高蛋白濃度飼料蛋白，最終30?l放大發(fā)酵所產(chǎn)飼料蛋白中粗蛋白含量達70%-75%；
22、（2）本發(fā)明提高了ddgs原料利用價值，提高了ddgs在畜禽飼料中應用價值。
1.一種高蛋白濃度飼料蛋白的制備方法，其特征在于它是利用廉價氮源多菌混合兩步發(fā)酵制備高蛋白濃度飼料蛋白，其具體方法步驟如下：
2.根據(jù)權利要求2所述的方法，其特征在于，上述步驟混合菌株中的米曲霉aspergillus?oryzae?cicc41461、米曲霉aspergillus?oryzae?atcc11488和產(chǎn)朊假絲酵母candida?utilis?cicc1807為尿素利用菌株，多菌混合固態(tài)發(fā)酵后尿素利用率達87-91%。
3.權利要求1所述制備方法在用于提高ddgs原料利用價值中的應用；所述的提高ddgs原料利用價值指的是：最終30?l放大發(fā)酵所產(chǎn)飼料蛋白中粗蛋白含量達70%-75%。