本發(fā)明涉及高分子材料和醫(yī)學(xué)工程領(lǐng)域，尤其涉及一種納米復(fù)合物、其制備方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(experimental?autoimmune?encephalomyelitis,eae)模型是多發(fā)性硬化(multiple?sclerosis,ms)的小鼠替代模型，多發(fā)性硬化是一種免疫介導(dǎo)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)慢性炎癥性疾病，主要以神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘和神經(jīng)退行性變?yōu)椴±硖卣?，主要損害脊髓、大腦以及視神經(jīng)，致殘率高。既往研究表明treg細(xì)胞減少(或功能障礙)和th17增多是ms主要致病機(jī)制，但近年來(lái)有學(xué)者通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，鐵死亡也是ms發(fā)病機(jī)制之一。從本質(zhì)上講，ms是由炎癥和細(xì)胞死亡的自動(dòng)放大機(jī)制驅(qū)動(dòng)的。目前的療法主要通過(guò)免疫抑制來(lái)改善疾病癥狀，沒有針對(duì)控制細(xì)胞死亡損傷的治療方法。

2、鐵死亡是一種新發(fā)現(xiàn)的程序性細(xì)胞死亡方式，主要由鐵平衡失調(diào)和脂質(zhì)過(guò)氧化作用驅(qū)動(dòng)，導(dǎo)致細(xì)胞氧化應(yīng)激，從而影響蛋白質(zhì)、核酸、脂質(zhì)代謝等過(guò)程，最終導(dǎo)致細(xì)胞死亡。近年來(lái)，鐵死亡被發(fā)現(xiàn)參與了ms的發(fā)生發(fā)展。鐵死亡的機(jī)制涉及鐵穩(wěn)態(tài)、脂質(zhì)代謝和氧化還原系統(tǒng)；多不飽和脂肪酸(pufa)的自氧化過(guò)程是鐵死亡的驅(qū)動(dòng)因素；自由基捕獲抗氧化劑(rta)可終止自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，形成穩(wěn)定的非自由基產(chǎn)物，防止細(xì)胞膜破壞；理想情況下，較好的rta通過(guò)直接終止具有高自由基捕獲能力的自氧化反應(yīng)來(lái)抑制鐵死亡。ferrostatin-1(fer-1)是最早報(bào)道的可抑制鐵死亡的合成rta之一，被廣泛應(yīng)用于鐵死亡研究中；鐵死亡抑制劑有望成為ms新的治療藥物，但小分子鐵死亡抑制劑半衰期較短，且無(wú)法在病灶處靶向釋放。因此，探索新型鐵死亡抑制劑遞送系統(tǒng)，延長(zhǎng)鐵死亡抑制劑體內(nèi)循環(huán)中的時(shí)間，使其更準(zhǔn)確于病灶處釋放藥物，減少副作用，緩解eae癥狀是非常有必要的。

3、活性氧(reactive?oxygen?species，ros)是機(jī)體氧化應(yīng)激時(shí)產(chǎn)生的主要分子，可造成dna損傷和基因不穩(wěn)定，ros的改變往往會(huì)導(dǎo)致各種疾病，如慢性腸胃疾病、自身免疫性疾病、脂肪肝、腫瘤等。近年來(lái)，利用正常組織與eae模型病灶處ros水平的差異，設(shè)計(jì)ros響應(yīng)性納米遞送系統(tǒng)，使其在病灶處高ros環(huán)境下釋放藥物，可提高藥物的靶向性和療效，成為新的方向。同樣，ros響應(yīng)性納米顆粒在鐵死亡抑制劑遞送中的應(yīng)用也引起了極大的關(guān)注。例如，利用ros響應(yīng)性納米顆粒遞送鐵死亡抑制劑前藥，能夠有效促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞介導(dǎo)的脊髓損傷修復(fù)，顯著抑制脊髓損傷后的鐵死亡和炎癥反應(yīng)，促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)。此外，納米藥物還可以提高藥物的生物利用度，并減少藥物的副作用。近年來(lái)，靶向鐵死亡以防治重大疾病的研究也在不斷深入。研究顯示，通過(guò)靶向鐵死亡可以治療多種疾病，包括腫瘤、神經(jīng)退行性疾病等。鐵死亡抑制劑還可以與其他治療手段聯(lián)合使用，以提高治療效果。

4、近年來(lái)，已有針對(duì)ms的疾病修正治療藥物獲批，但仍沒有藥物能夠完全預(yù)防或逆轉(zhuǎn)漸進(jìn)性的神經(jīng)系統(tǒng)退行性變，ms患者仍亟需更有效的新療法。鐵死亡是一種新發(fā)現(xiàn)的程序性細(xì)胞死亡方式，聚焦于鐵死亡抑制劑有望為ms患者提供新的診療思路；基于小分子鐵死亡抑制劑半衰期較短，需要頻繁注射維持有效藥物濃度，且病灶部位作用效率低的關(guān)鍵問題。亟需研發(fā)一種可定向釋放鐵死亡抑制劑的納米遞送系統(tǒng)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、有鑒于此，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于提供一種納米復(fù)合物、其制備方法及應(yīng)用，本發(fā)明制備的納米復(fù)合物可以實(shí)現(xiàn)對(duì)eae模型的治療，同時(shí)，具有良好的生物安全性，同時(shí)具有ros響應(yīng)性，使得藥物可實(shí)現(xiàn)較高的載藥效率，延長(zhǎng)藥物循環(huán)時(shí)間，避免過(guò)早釋放，減少副作用，增強(qiáng)治療效果。

2、本發(fā)明提供了一種納米復(fù)合物的制備方法，包括以下步驟：

3、將peant-fer-1、磷脂-酮縮硫醇-聚乙二醇、磷脂-聚乙二醇和二甲基亞砜混勻后，得到納米復(fù)合物；

4、所述peant-fer-1具有式ⅰ所示結(jié)構(gòu)；

5、

6、式ⅰ中，p為3～12中的任何一個(gè)整數(shù)，q為3～10中的任何一個(gè)整數(shù)，r為1～5中的任何一個(gè)整數(shù)。

7、優(yōu)選的，所述peant-fer-1的制備方法包括以下步驟：

8、在保護(hù)氣條件下，將包括peg-pan-tk、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、n-羥基丁二酰亞胺和四氫呋喃的混合溶液與包括3-氨基-4-環(huán)己基氨基苯甲酸乙酯和三乙胺的混合溶液混合后，進(jìn)行反應(yīng)，得到peant-fer-1；

9、所述peg-pan-tk具有式ⅱ所示結(jié)構(gòu)；

10、

11、式ⅱ中，m為3～12中的任何一個(gè)整數(shù)，n為4～13中的任何一個(gè)整數(shù)。

12、優(yōu)選的，所述peg-pan-tk的制備方法包括以下步驟：

13、在保護(hù)氣條件下，將包括3,3'-(丙烷-2,2-二基雙(硫烷二基))二丙酸、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、n-羥基丁二酰亞胺和四氫呋喃的混合溶液與peg-panh和三乙胺混合后，進(jìn)行反應(yīng)，得到peg-pan-tk；

14、所述peg-panh具有式ⅲ所示結(jié)構(gòu)；

15、

16、式ⅲ中，k為7～25中的任何一個(gè)整數(shù)。

17、優(yōu)選的，所述peg-panh的制備方法包括以下步驟：

18、將peg-pan-boc溶于鹽酸-四氫呋喃溶液中，持續(xù)通入hcl氣體并在室溫下攪拌反應(yīng)，得到peg-panh；

19、所述peg-pan-boc具有式ⅳ所示結(jié)構(gòu)；

20、

21、式ⅳ中，k為7～25中的任何一個(gè)整數(shù)。

22、優(yōu)選的，所述peg-pan-boc的制備方法包括以下步驟：

23、將peg-page、2-叔丁氧羰基氨基乙硫醇、安息香雙甲醚和二氯甲烷混合后，在保護(hù)氣條件、紫外光照射下攪拌反應(yīng)，得到peg-pan-boc；

24、所述peg-page具有式ⅴ所示結(jié)構(gòu)；

25、

26、式ⅴ中，k為7～25中的任何一個(gè)整數(shù)。

27、優(yōu)選的，所述peg-page的制備方法包括以下步驟：

28、在二氧化碳條件下，將烯丙基縮水甘油醚、(1s,2s)-(+)-1,2-環(huán)己烷二胺-n,n'-雙(3,5-二-t-丁基水楊醛)鈷(iii)-三氟乙酸酯、雙(三苯基正膦基)三氟乙酸銨、鏈轉(zhuǎn)移劑、二氯甲烷和甲苯混合后，進(jìn)行聚合反應(yīng)，得到聚碳酸酯聚合物peg-page。

29、優(yōu)選的，所述烯丙基縮水甘油醚、salen?co-tfa、ppn-tfa和鏈轉(zhuǎn)移劑的摩爾比為400：18～22：0.5～1.5：0.5～1.5；

30、所述二氧化碳的濃度為2.5～3.5mpa；

31、所述聚合反應(yīng)的溫度為20～30℃。

32、優(yōu)選的，所述peg-page、2-叔丁氧羰基氨基乙硫醇和安息香雙甲醚的摩爾比為8～12：125～135：0.5～1.5；

33、所述反應(yīng)的溫度為20～30℃；

34、所述反應(yīng)后，還包括：將所述反應(yīng)液與乙醚混合進(jìn)行沉淀，離心除去上清液，固體再用二氯甲烷溶解、乙醚沉淀，得到的固體減壓烘干，得到peg-pan-boc。

35、優(yōu)選的，所述peg-pan-boc與鹽酸-四氫呋喃溶液的用量比為380～420mg：3～7ml；

36、所述攪拌反應(yīng)后，還包括：將所述反應(yīng)液與乙醚混合進(jìn)行沉淀，離心除去上清液，固體再用二氯甲烷溶解、乙醚沉淀，得到的固體減壓烘干，得到peg-panh。

37、優(yōu)選的，所述3,3'-(丙烷-2,2-二基雙(硫烷二基))二丙酸、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、n-羥基丁二酰亞胺、peg-panh和三乙胺的摩爾比為13～17：0.5～1.5：13～17：13～17：28～32；

38、所述反應(yīng)后，還包括：將反應(yīng)液凍干后，在去離子水中透析，再將透析液凍干，得到peg-pan-tk。

39、優(yōu)選的，所述peg-pan-tk、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、n-羥基丁二酰亞胺、3-氨基-4-環(huán)己基氨基苯甲酸乙酯和三乙胺的摩爾比為2.5～3.5：8～12：31～35：31～35；

40、所述反應(yīng)后，還包括：將反應(yīng)液凍干后，在去離子水中透析，再將透析液凍干，得到peant-fer-1。

41、優(yōu)選的，所述peant-fer-1、磷脂-酮縮硫醇-聚乙二醇和磷脂-聚乙二醇的質(zhì)量比為0.5～1.5：0.5～1.5：0.5～1.5；

42、所述混勻后，還包括：滴加雙蒸水，超聲后，透析，制得納米復(fù)合物。

43、本發(fā)明還提供了一種上文所述制備方法制得的納米復(fù)合物。

44、本發(fā)明還提供了一種上文所述納米復(fù)合物在以下至少一方面中的應(yīng)用；

45、1)制備藥物擔(dān)載材料；

46、2)制備抗炎藥物；

47、3)制備鐵死亡抑制藥物。

48、優(yōu)選的，所述藥物擔(dān)載材料為定向釋放鐵死亡抑制劑的納米遞送材料或ros響應(yīng)性納米遞送材料；

49、所述抗炎藥物為抗脊髓炎藥物。

50、本發(fā)明提供了一種納米復(fù)合物的制備方法，包括以下步驟：將peant-fer-1、磷脂-酮縮硫醇-聚乙二醇(dspe-tk-peg)、磷脂-聚乙二醇(dspe-peg)和二甲基亞砜(dmso)混勻后，得到納米復(fù)合物；所述peant-fer-1具有式ⅰ所示結(jié)構(gòu)；式ⅰ中，p為3～12中的任何一個(gè)整數(shù)，q為3～10中的任何一個(gè)整數(shù)，r為1～5中的任何一個(gè)整數(shù)。

51、本發(fā)明提供了一種具有ros響應(yīng)性的鐵死亡抑制納米復(fù)合物的制備方法，載體為生物可降解的聚合物，peg作為引發(fā)劑，tk鍵刺激響應(yīng)釋放藥物；利用病灶處與正常組織ros的差異，在病灶處高ros水平下，刺激釋放fer-1，從而實(shí)現(xiàn)抑制鐵死亡、抗炎、消耗ros等多種作用，實(shí)現(xiàn)對(duì)eae模型的治療，同時(shí)，納米復(fù)合物具有良好的生物安全性。

52、小分子fer-1半衰期較短，本發(fā)明通過(guò)自組裝包裹形成納米粒子(即納米復(fù)合物)，同時(shí)其具有ros響應(yīng)性，使得藥物可實(shí)現(xiàn)較高的載藥效率，延長(zhǎng)藥物循環(huán)時(shí)間，避免過(guò)早釋放，減少副作用，增強(qiáng)治療效果。