1.一種集成edna和qpcr技術(shù)的植物病原真菌監(jiān)測(cè)方法,其特征在于:其正向引物its9munngs核苷酸序列如seq?id?no.1所示,反向引物its4ngsuni核苷酸序列如seqidno.2所示。
2.一種集成edna和qpcr技術(shù)的植物病原真菌監(jiān)測(cè)方法,其特征在于:包括以下步驟:
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種集成edna和qpcr技術(shù)的植物病原真菌監(jiān)測(cè)方法,其特征在于:所述步驟(1)中空氣樣品采用空氣孢子收集器進(jìn)行采集,在每個(gè)樣點(diǎn)將裝有空氣濾膜的空氣孢子收集器敞口放置在農(nóng)田中央,在空氣中暴露8~12min且每張膜2~4個(gè)重復(fù),每個(gè)樣點(diǎn)收集1張膜并將濾膜放置于培養(yǎng)皿中用封口膜進(jìn)行封口;
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種集成edna和qpcr技術(shù)的植物病原真菌監(jiān)測(cè)方法,其特征在于:所述步驟(3)中dna宏條形碼監(jiān)測(cè)具體為:選取真菌its區(qū)域進(jìn)行pcr擴(kuò)增,使用包括權(quán)利要求1中的真菌特異性引物對(duì)為its9munngs和its4ngsuni進(jìn)行測(cè)序及建庫。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種集成edna和qpcr技術(shù)的植物病原真菌監(jiān)測(cè)方法,其特征在于:所述步驟(3)和步驟(4)中目標(biāo)植物病原菌為落葉松芽枯病菌。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種集成edna和qpcr技術(shù)的植物病原真菌監(jiān)測(cè)方法,其特征在于:所述步驟(4)中以采集樣點(diǎn)空氣、水、土壤環(huán)境樣品的總dna為模板,通過落葉松芽枯病菌的特異性引物對(duì)clte-f、clte-r和探針clte-fam進(jìn)行taqman熒光定量pcr檢測(cè),其中引物對(duì)中正向引物clte-f的核苷酸序列如seq?id?no.3所示,反向引物clte-r核苷酸序列如seq?id?no.4所示,探針clte-fam核苷酸序列如seq?id?no.5所示。
7.一種基于edna及qpcr技術(shù)監(jiān)測(cè)植物病原真菌的試劑盒,其特征在于:包括由權(quán)利要求6中所述落葉松芽枯病菌的特異性引物對(duì)和探針組成的組合物。
8.權(quán)利要求7所述的試劑盒在監(jiān)測(cè)植物病原真菌中的應(yīng)用。