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一種溶劑耐受型轉(zhuǎn)氨酶突變體、基因工程菌及在制備瑞美吉泮中間體中的應(yīng)用

文檔序號:41852420發(fā)布日期:2025-05-09 18:11閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種穩(wěn)定性提高的ω-轉(zhuǎn)氨酶突變體,其特征在于,所述ω-轉(zhuǎn)氨酶突變體是將seqid?no.2所示氨基酸序列第22位、第398位、第419位進行單位點或多點聯(lián)合突變獲得。

2.如權(quán)利要求1所述ω-轉(zhuǎn)氨酶突變體,其特征在于,所述ω-轉(zhuǎn)氨酶突變體是將seq?idno.2所示氨基酸序列突變?yōu)橄铝兄唬?1)第22位的苯丙氨酸突變成亮氨酸;(2)第22位的苯丙氨酸突變成亮氨酸、第398位的甘氨酸突變成丙氨酸;(3)第22位的苯丙氨酸突變成亮氨酸、第398位的甘氨酸突變成丙氨酸、同時第419位的甘氨酸突變成蘇氨酸。

3.編碼權(quán)利要求2所述的ω-轉(zhuǎn)氨酶突變體的基因。

4.含有權(quán)利要求3所述編碼基因的重組載體。

5.含有權(quán)利要求3所述編碼基因的基因工程菌。

6.如權(quán)利要求1或2所述的穩(wěn)定性提高的ω-轉(zhuǎn)氨酶突變體在微生物催化瑞美吉泮中間體前體酮制備瑞美吉泮中間體中的應(yīng)用。

7.如權(quán)利要求6所述的應(yīng)用,其特征在于,所述的應(yīng)用為:以含ω-轉(zhuǎn)氨酶突變體編碼基因的重組基因工程菌經(jīng)發(fā)酵培養(yǎng)獲得的濕菌體或濕菌體超聲破碎提取的純酶液為催化劑,配制緩沖液為反應(yīng)介質(zhì)構(gòu)成反應(yīng)體系,進行生物催化反應(yīng),反應(yīng)結(jié)束后,反應(yīng)液分離純化,獲得(5s,6s,9r)-5-氨基-6-(2,3-二氟苯基)-6,7,8,9-四氫-5h-環(huán)庚[b]吡啶-9-醇二鹽酸鹽;所述瑞美吉泮中間體前體酮是指(6s,9r)-6-(2,3-二氟苯基)-9-羥基-6,7,8,9-四氫-5h-環(huán)庚[b]吡啶-5-酮。

8.如權(quán)利要求7所述的應(yīng)用,其特征在于,所述濕菌體按如下方法制備:將含ω-轉(zhuǎn)氨酶突變體編碼基因的重組基因工程菌接種至含有卡那霉素的lb液體培養(yǎng)基培養(yǎng),再接種至新鮮的卡那霉素抗性的lb液體培養(yǎng)基中培養(yǎng),加入iptg誘導(dǎo)培養(yǎng)后,離心棄去上清液,收集沉淀,即獲得所述的濕菌體。

9.如權(quán)利要求8所述的應(yīng)用,其特征在于,所述純酶液按如下方法制備:將所述濕菌體以結(jié)合緩沖液重懸后,冰浴條件下破碎,離心,除去雜蛋白,隨后以緩沖液洗脫并收集目的蛋白,磷酸鈉緩沖液透析,收集截流液即為純酶液。

10.如權(quán)利要求7所述的應(yīng)用,其特征在于,所述催化劑包括ω-轉(zhuǎn)氨酶及其突變體的重組基因工程菌濕菌體、粗酶液、粗酶粉、純酶液。


技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及工程酶領(lǐng)域,具體涉及一種溶劑耐受型轉(zhuǎn)氨酶突變體、基因工程菌及在制備瑞美吉泮中間體中的應(yīng)用。本發(fā)明提供了一種ω?轉(zhuǎn)氨酶突變體,所述ω?轉(zhuǎn)氨酶突變體是將SEQ?ID?NO.2所示氨基酸序列第22位、第398位、第419位進行單位點或多點聯(lián)合突變獲得。本發(fā)明提供的ω?轉(zhuǎn)氨酶突變體,對于瑞美吉泮中間體的制備合成轉(zhuǎn)化率、有機溶劑耐受性和產(chǎn)物立體選擇性均較高,相較于現(xiàn)有技術(shù),具有較好工業(yè)應(yīng)用前景,同時成本較低,有利于廣泛應(yīng)用。

技術(shù)研發(fā)人員:程峰,薛亞平,葛續(xù)哲,陳歡,鄭裕國
受保護的技術(shù)使用者:浙江工業(yè)大學
技術(shù)研發(fā)日:
技術(shù)公布日:2025/5/8
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