背景技術(shù)：

1、癌癥仍然是世界上死亡的主要原因之一。最近的統(tǒng)計(jì)報(bào)告世界人口的13％死于癌癥。根據(jù)國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)(iarc)的估計(jì)，在2012年，世界范圍內(nèi)有1410萬(wàn)例新癌癥病例和820萬(wàn)例癌癥死亡。到2030年，由于人口增長(zhǎng)和老齡化以及暴露于如吸煙、不健康飲食和身體活動(dòng)不足等風(fēng)險(xiǎn)因素，預(yù)計(jì)全球負(fù)擔(dān)將增長(zhǎng)到2170萬(wàn)例新癌癥病例和1300萬(wàn)例癌癥死亡。進(jìn)一步地，疼痛以及癌癥治療的醫(yī)療費(fèi)用使癌癥患者和其家人兩者的生活質(zhì)量下降。

2、用嵌合抗原受體(car-t)工程化的t細(xì)胞在治療如癌癥等疾病方面具有極大的治療潛力。car-t治療賦予t細(xì)胞強(qiáng)大的靶親和力和信號(hào)傳導(dǎo)功能。然而，car-t療法令人印象深刻的功效經(jīng)常伴隨著嚴(yán)重的副作用，如細(xì)胞因子釋放綜合征(crs)。因此，仍然存在對(duì)于開發(fā)具有減少的副作用的car-t治療和策略的未滿足的需要。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本文提供了免疫細(xì)胞，所述免疫細(xì)胞包括嵌合抗原受體(car)，其中所述(car)包括：(a)胞外結(jié)構(gòu)域，所述胞外結(jié)構(gòu)域包括抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域；(b)跨膜結(jié)構(gòu)域；以及(c)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域，所述胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域包括共刺激內(nèi)結(jié)構(gòu)域，其中所述共刺激內(nèi)結(jié)構(gòu)域包括來(lái)自4-1bb/cd137的胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域和五個(gè)另外的氨基酸。

2、在一些實(shí)施例中，所述嵌合抗原受體是單個(gè)多肽。在一些實(shí)施例中，所述嵌合抗原受體包含兩個(gè)多肽。

3、在一些實(shí)施例中，所述共刺激內(nèi)結(jié)構(gòu)域包括來(lái)自4-1bb/cd137的胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域和五個(gè)另外的氨基酸，其中所述五個(gè)另外的氨基酸由seq?id?no:1編碼。在一些實(shí)施例中，所述共刺激內(nèi)結(jié)構(gòu)域包括seq?id?no:2。

4、在一些實(shí)施例中，所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域是人源化的。在一些實(shí)施例中，所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域是人的。在一些實(shí)施例中，所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域是scfv。在一些實(shí)施例中，所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域特異性結(jié)合與疾病相關(guān)的抗原。在一些實(shí)施例中，所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域特異性結(jié)合腫瘤抗原。在一些實(shí)施例中，所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域特異性結(jié)合選自由以下組成的組的抗原：磷脂酰肌醇聚糖-3(gpc3)、惡性腫瘤變異受體(mvr)和cd19。

5、在一些實(shí)施例中，所述跨膜結(jié)構(gòu)域是從選自由以下組成的組的蛋白質(zhì)中選擇的跨膜結(jié)構(gòu)域：4-1bb/cd137、活化的nk細(xì)胞受體、免疫球蛋白、b7-h3、baffr、blame(slamf8)、btla、cd100(sema4d)、cd103、cd160(by55)、cd18、cd19、cd19a、cd2、cd247、cd27、cd276(b7-h3)、cd28、cd29、cd3δ、cd3ε、cd3γ、cd3ζ、cd30、cd4、cd40、cd49a、cd49d、cd49f、cd69、cd7、cd84、cd8、cd8α、cd8β、cd96(觸覺的)、cd11a、cd11b、cd11c、cd11d、cds、ceacam1、crt?am、細(xì)胞因子受體、dap-10、dnam1(cd226)、fcγ受體、gads、gitr、hvem(lightr)、ia4、icam-1、igα(cd79a)、il-2rβ、il-2rγ、il-7rα、誘導(dǎo)型t細(xì)胞共刺激因子(icos)、整合素、itga4、itga6、itgad、itgae、itgal、itgam、itgax、itgb2、itgb7、itgb1、kirds2、lat、lfa-1、與cd83特異性結(jié)合的配體、light、ltbr、ly9(cd229)、淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原-1(lfa-1)、mhc?1類分子、nkg2c、nkg2d、nkp30、nkp44、nkp46、nkp80(klrf1)、ox-40、pag/cbp、程序性死亡-1(pd-1)、psgl1、selplg(cd162)、信號(hào)傳導(dǎo)淋巴細(xì)胞活化分子(slam蛋白)、slam(slamf1)、slamf4(cd244)、slamf6(ntb-a)、slamf7、slp-76、tnf受體蛋白、tnfr2、tnfsf14、toll配體受體、trance/rankl、vla1和vla-6。在一些實(shí)施例中，所述跨膜結(jié)構(gòu)域是來(lái)自cd8α的跨膜結(jié)構(gòu)域。在一些實(shí)施例中，所述胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域進(jìn)一步包括來(lái)自cd3ζ的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域。

6、在一些實(shí)施例中，所述嵌合抗原受體進(jìn)一步包括信號(hào)肽或前導(dǎo)序列。在一些實(shí)施例中，所述嵌合抗原受體進(jìn)一步包括鉸鏈區(qū)。在一些實(shí)施例中，所述鉸鏈區(qū)是cd8α鉸鏈。在一些實(shí)施例中，所述嵌合抗原受體進(jìn)一步包括另外的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域。在一些實(shí)施例中，所述另外的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域是scfv。

7、在一些實(shí)施例中，所述免疫細(xì)胞是人免疫細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，所述人免疫細(xì)胞是自體人免疫細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，所述人免疫細(xì)胞是同種異體人免疫細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，所述免疫細(xì)胞是t細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，所述免疫細(xì)胞是nk細(xì)胞。

8、本文提供了核酸，所述核酸對(duì)嵌合抗原受體(car)進(jìn)行編碼，其中所述嵌合抗原受體包括：(a)胞外結(jié)構(gòu)域，所述胞外結(jié)構(gòu)域包括抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域；(b)跨膜結(jié)構(gòu)域；以及(c)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域，所述胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域包括共刺激內(nèi)結(jié)構(gòu)域，其中所述共刺激內(nèi)結(jié)構(gòu)域包括來(lái)自4-1bb/cd137的胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域和五個(gè)另外的氨基酸。

9、在一些實(shí)施例中，所述嵌合抗原受體是單個(gè)多肽。在一些實(shí)施例中，所述嵌合抗原受體包含兩個(gè)多肽。

10、在一些實(shí)施例中，所述共刺激內(nèi)結(jié)構(gòu)域包括來(lái)自4-1bb/cd137的胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域和五個(gè)另外的氨基酸，其中所述五個(gè)另外的氨基酸由seq?id?no:1的核苷酸序列編碼。在一些實(shí)施例中，所述共刺激內(nèi)結(jié)構(gòu)域包括seq?id?no:2。

11、在一些實(shí)施例中，所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域是人源化的。在一些實(shí)施例中，所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域是人的。在一些實(shí)施例中，所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域是scfv。在一些實(shí)施例中，所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域特異性結(jié)合與疾病相關(guān)的抗原。在一些實(shí)施例中，所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域特異性結(jié)合腫瘤抗原。在一些實(shí)施例中，所述抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域特異性結(jié)合選自由以下組成的組的抗原：聚糖-3(gpc3)、惡性腫瘤變異受體(mvr)和cd19。

12、在一些實(shí)施例中，所述跨膜結(jié)構(gòu)域是從選自由以下組成的組的蛋白質(zhì)中選擇的跨膜結(jié)構(gòu)域：4-1bb/cd137、活化的nk細(xì)胞受體、免疫球蛋白、b7-h3、baffr、blame(slamf8)、btla、cd100(sema4d)、cd103、cd160(by55)、cd18、cd19、cd19a、cd2、cd247、cd27、cd276(b7-h3)、cd28、cd29、cd3δ、cd3ε、cd3γ、cd3ζ、cd30、cd4、cd40、cd49a、cd49d、cd49f、cd69、cd7、cd84、cd8、cd8α、cd8β、cd96(觸覺的)、cd11a、cd11b、cd11c、cd11d、cds、ceacam1、crt?am、細(xì)胞因子受體、dap-10、dnam1(cd226)、fcγ受體、gads、gitr、hvem(lightr)、ia4、icam-1、igα(cd79a)、il-2rβ、il-2rγ、il-7rα、誘導(dǎo)型t細(xì)胞共刺激因子(icos)、整合素、itga4、itga6、itgad、itgae、itgal、itgam、itgax、itgb2、itgb7、itgb1、kirds2、lat、lfa-1、與cd83特異性結(jié)合的配體、light、ltbr、ly9(cd229)、淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原-1(lfa-1)、mhc?1類分子、nkg2c、nkg2d、nkp30、nkp44、nkp46、nkp80(klrf1)、ox-40、pag/cbp、程序性死亡-1(pd-1)、psgl1、selplg(cd162)、信號(hào)傳導(dǎo)淋巴細(xì)胞活化分子(slam蛋白)、slam(slamf1)、slamf4(cd244)、slamf6(ntb-a)、slamf7、slp-76、tnf受體蛋白、tnfr2、tnfsf14、toll配體受體、trance/rankl、vla1和vla-6。在一些實(shí)施例中，所述跨膜結(jié)構(gòu)域是來(lái)自cd8α的跨膜結(jié)構(gòu)域。

13、在一些實(shí)施例中，所述胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域進(jìn)一步包括來(lái)自cd3ζ的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域。在一些實(shí)施例中，所述嵌合抗原受體進(jìn)一步包括信號(hào)肽或前導(dǎo)序列。在一些實(shí)施例中，所述嵌合抗原受體進(jìn)一步包括鉸鏈區(qū)。在一些實(shí)施例中，所述鉸鏈區(qū)是cd8α鉸鏈。

14、本文提供了載體，所述載體包括本文所描述的核酸中的任何一種核酸。在一些實(shí)施例中，所述載體進(jìn)一步包括與核酸可操作地連接的啟動(dòng)子。在一些實(shí)施例中，所述啟動(dòng)子是組成型啟動(dòng)子。在一些實(shí)施例中，所述啟動(dòng)子是誘導(dǎo)型啟動(dòng)子。在一些實(shí)施例中，所述載體是病毒載體。在一些實(shí)施例中，所述病毒載體是慢病毒載體。

15、本文提供了產(chǎn)生工程化免疫細(xì)胞的方法，所述方法包括：將本文所描述的核酸中的任何一種核酸或本文所描述的載體中的任何一種載體引入到免疫細(xì)胞中，由此產(chǎn)生所述工程化免疫細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，所述方法進(jìn)一步包括在所述引入步驟之后，培養(yǎng)所述工程化免疫細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，所述免疫細(xì)胞是t細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，所述免疫細(xì)胞是nk細(xì)胞。

16、在一些實(shí)施例中，所述方法進(jìn)一步包括在所述引入步驟之前，從受試者獲得所述免疫細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，所述方法進(jìn)一步包括向所述受試者施用所述工程化免疫細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，所述受試者已被診斷或鑒定為患有癌癥。

17、本文提供了工程化免疫細(xì)胞，所述工程化免疫細(xì)胞通過(guò)本文所描述的方法中的任一方法產(chǎn)生。

18、本文提供了藥物組合物，所述藥物組合物包括本文所描述的工程化免疫細(xì)胞中的任何一種工程化免疫細(xì)胞以及藥學(xué)上可接受的載體。

19、本文提供了治療受試者的癌癥的方法，所述方法包括向所述受試者施用本文所描述的工程化免疫細(xì)胞中的任何一種工程化免疫細(xì)胞或本文所描述的藥物組合物中的任何一種藥物組合物。在一些實(shí)施例中，所述癌癥是抗磷脂酰肌醇聚糖-3相關(guān)癌癥、抗cd?19相關(guān)癌癥或抗mvr相關(guān)癌癥。在一些實(shí)施例中，所述癌癥是癌、淋巴瘤(例如，霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤(hodgkin's?and?non-hodgkin's?lymphomas))、母細(xì)胞瘤、肉瘤、白血病、鱗狀細(xì)胞癌、小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、肺腺癌、肺鱗狀細(xì)胞癌、腹膜癌、肝細(xì)胞癌、胃癌、胰腺癌、膠質(zhì)瘤、宮頸癌、卵巢癌、肝癌(liver?cancer)、膀胱癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、結(jié)直腸癌、子宮內(nèi)膜或子宮癌、唾液腺癌、腎癌、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌(livercarcinoma)、其它淋巴組織增殖性病癥和各種類型的頭頸癌。在一些實(shí)施例中，所述受試者先前已被施用選自由以下組成的組的一種或多種另外的抗癌療法：電離輻射、化學(xué)治療劑、治療性抗體和檢查點(diǎn)抑制劑。在一些實(shí)施例中，所述受試者已被鑒定或診斷為患有所述癌癥。